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https://hdl.handle.net/20.500.12104/81031
Registro completo de metadatos
Campo DC | Valor | Lengua/Idioma |
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dc.contributor.advisor | Córdova López, Jesús Antonio | |
dc.contributor.advisor | Solís Pacheco, Josué Raymundo | |
dc.contributor.author | Ramírez Ledezma, Sonia Alejandra | |
dc.date.accessioned | 2020-06-08T20:04:12Z | - |
dc.date.available | 2020-06-08T20:04:12Z | - |
dc.date.issued | 2018-03-02 | |
dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/20.500.12104/81031 | - |
dc.identifier.uri | https://wdg.biblio.udg.mx | |
dc.description.abstract | Los métodos de conservación de alimentos cambian conforme a las necesidades de los consumidores. La necesidad por alimentos que no se deterioren y que posean una vida útil más extensa, empleando menos procesamientos y aditivos. En particular, la adición de conservadores químicos en los alimentos, debería ser evitada. Una de las alternativas propuestas y recientemente aplicadas con éxito para la conservación de alimentos, son las bacteriocinas. Estas moléculas son inocuas para el consumidor y tienen un potencial antimicrobiano muy prometedor. Las bacteriocinas usadas para la conservación de alimentos provienen generalmente de bacterias probióticas, con el distintivo “Generalmente Reconocido como Seguro” (GRAS). Los extractos de los cultivos de Lactobacillus rhamnosus HN001 (cepa con distintivo GRAS), han demostrado su capacidad de inhibición del crecimiento de otras bacterias, por lo que estos extractos líquidos, conteniendo posibles bacteriocinas, fueron sometidos a purificación, mediante ultrafiltración, y a una caracterización molecular preeliminar. Para la producción de bacteriocinas de L. rhamnosus HN001, fue utilizado el medio MRS, suplementado con prebióticos. La fermentación se llevó a cabo durante 24 h a 37 °C, en condiciones microaerófilas y sin agitación. En la purificación, se obtuvieron rendimientos de la bacteriocina de hasta 64 % y un factor de purificación de 87. La bacteriocina purificada fue caracterizada como un péptido, con un peso molecular de aproximadamente 6 kDa y mostró actividad en un rango de pH entre 3 y 5. La bacteriocina fue resistente al calentamiento de hasta 120 °C y a la degradación por enzimas proteolíticas. La bacteriocina mostró actividad inhibitoria sobre bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Estos resultados sugieren que, la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 puede ser utilizada como un conservador de alimentos, después de los estudios pertinentes y de su tipificación genética. | |
dc.description.tableofcontents | INDICE RESUMEN ................................................................................................................................... I AGRADECIMIENTOS ................................................................................................................. II ABREVIATURAS ....................................................................................................................... III INDICE ...................................................................................................................................... VI LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................... X LISTA DE TABLAS ................................................................................................................. X LISTA DE GRÁFICAS ............................................................................................................ XI 1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1 2. ANTECEDENTES ................................................................................................................ 3 2.1 Bacterias ácido lácticas...................................................................................................... 3 2.1.1 Antecedentes históricos .............................................................................................. 3 2.1.2 Generalidades ............................................................................................................. 4 2.1.3 Bacterias ácido lácticas y su actividad probiótica ........................................................ 6 2.1.4 Género Lactobacillus ................................................................................................... 7 2.1.5 Lactobacillus rhamnosus ........................................................................................... 16 2.2 Bacteriocinas de bacterias Gram Positivas ...................................................................... 19 2.2.1 Clasificación de las bacteriocinas de bacterias Gram-Positivas ................................. 20 2.2.2 Nomenclatura. ........................................................................................................... 25 2.2.3 Genética y biosíntesis ............................................................................................... 25 2.2.4 Mecanismo de acción. ............................................................................................... 30 2.2.5 Resistencia a bacteriocinas ....................................................................................... 33 2.2.6 Bacteriocinas v/s antibióticos ..................................................................................... 34 2.2.7 Aplicaciones .............................................................................................................. 36 2.3 Obtención de bacteriocinas .............................................................................................. 38 2.3.1 Métodos de detección para bacteriocinas. ................................................................. 39 2.3.2 Factores que modifican la producción ....................................................................... 40 2.4 Purificación de bacteriocinas ........................................................................................... 41 2.5 Caracterización de bacteriocinas ..................................................................................... 41 2.6 Bacteriocinas de Lactobacillus rhamnosus....................................................................... 42 2.7 Bacteriocinas y antibióticos .................................... 3. JUSTIFICACIÓN ................................................................................................................ 44 4. HIPÓTESIS ........................................................................................................................ 45 5. OBJETIVOS ....................................................................................................................... 45 5.1 Objetivo general ............................................................................................................... 45 5.2 Objetivos específicos ....................................................................................................... 45 6. MATERIALES Y MÉTODOS .............................................................................................. 46 6.1 Cepas de bacterias y su conservación. ............................................................................ 46 6.2 Reactivos ......................................................................................................................... 47 6.3 Medios de cultivo ............................................................................................................. 47 6.4 Activación de la cepa L. rhamnosus HN001 y preparación de inóculos ............................ 48 6.5 Fermentaciones para la producción de la bacteriocina .................................................... 48 6.5.1 Montaje de las Fermentaciones de L. rhamnosus ..................................................... 48 6.5.2 Cálculo de los parámetros cinéticos del crecimiento de Lactobacillus rhamnosus HN001 ................................................................................................................................ 49 6.6 Determinaciones analíticas .............................................................................................. 50 6.6.1 Medición de la densidad óptica.................................................................................. 50 6.6.2 Determinación de la biomasa por método de peso seco ........................................... 50 6.6.3 Medición de pH ......................................................................................................... 51 6.6.4 Determinación de azúcares totales por el método del Fenol-Sulfúrico ....................... 51 6.6.5 Determinación de proteínas por el método de Lowry. ................................................ 51 6.6.7 Determinación de la actividad antimicrobiana ............................................................ 52 6.7 Purificación de la bacteriocina a partir del cultivo líquido de L. rhamnosus ...................... 53 6.7.1 Extracto libre de células (extracto crudo) ................................................................... 53 6.7.2 Purificación de la bacteriocina por ultrafiltración ....................................................... 54 6.8 Caracterización de la bacteriocina .................................................................................. 54 6.8.1 Rango de pH en el que existe actividad antimicrobiana de la bacteriocina ............... 54 6.8.2 Resistencia de la bacteriocina a enzimas hidrolíticas ............................................... 54 6.8.3 Efecto de la temperatura de incubación en la actividad antimicrobiana de la bacteriocina ....................................................................................................................... 56 6.8.4 Estabilidad de la bacteriocina ante varios aditivos empleados en alimentos .............. 56 6.8.5 Determinación del peso molecular ............................................................................. 56 6.8.6 Espectro de inhibición de bacterias de la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 ...... 58 6.8.7 Comparación de la actividad de la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 con la actividad de la bacteriocina comercial Nisina. .................................................................... 58 7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .............................................................................................. 59 7.1 Cinéticas fermentativas de Lactobacillus rhamnosus HN001 en medio MRS modificado . 59 7.1.1 Determinación de las condiciones de aireación en el crecimiento de L. rhamnosus .. 59 7.2 Purificación de la bacteriocina producida por L. rhamnosus en medio MRS modificado. . 62 7.2.1 Purificación por ultrafiltración con membranas. ......................................................... 62 7.3 Caracterización bioquímica de la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 .......................... 63 7.3.1 Rango de pH en que el existe actividad antimicrobiana ............................................. 64 7.3.2 Actividad residual de la bacteriocina después de los tratamientos desnaturalizantes 65 7.3.3 Estimación del peso molecular de la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 por electroforesis SDS-PAGE .................................................................................................. 68 7.4 Efecto de la presencia de aditivos de alimentos en la actividad de la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 ................................................................................................................. 69 7.5 Espectro de inhibición de la bacteriocina de L. rhamnosus HN001 ................................. 71 8. CONCLUSIONES ................................................................................................................. 73 9. PERSPECTIVAS ................................................................................................................... 75 10. BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................................. 76 ANEXOS ................................................................................................................................... 82 | |
dc.format | application/PDF | |
dc.language.iso | spa | |
dc.publisher | Biblioteca Digital wdg.biblio | |
dc.publisher | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights.uri | https://www.riudg.udg.mx/info/politicas.jsp | |
dc.subject | Produccion | |
dc.subject | Purificacion | |
dc.subject | Caracterizacion | |
dc.subject | Bacteriocina De Lactobacillus Rhamnosus Hn001 | |
dc.title | Producción, purificación y caracterización de una bacteriocina de Lactobacillus rhamnosus HN001 | |
dc.type | Tesis de Maestria | |
dc.rights.holder | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights.holder | Ramírez Ledezma, Sonia Alejandra | |
dc.coverage | GUADALAJARA, JALISCO | |
dc.type.conacyt | masterThesis | - |
dc.degree.name | MAESTRIA EN CIENCIAS EN QUIMICA | - |
dc.degree.department | CUCEI | - |
dc.degree.grantor | Universidad de Guadalajara | - |
dc.degree.creator | MAESTRA EN CIENCIAS EN QUIMICA | - |
Aparece en las colecciones: | CUCEI |
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